質(zhì)譜分析/脂質(zhì)組學分析/靶標(非靶標)代謝組分析
質(zhì)譜分析
中國生命科學實驗技術(shù)服務聯(lián)盟引進美國安捷倫公司的液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀。形成了高通量、高靈敏度和高分辨率的規(guī)模化蛋白質(zhì)分析支撐技術(shù)體系,為促進蛋白質(zhì)組學及相關研究的發(fā)展,共享先進的技術(shù)資源,近年來生物質(zhì)譜實驗室蛋白質(zhì)/多肽質(zhì)譜鑒定、生物工程藥物結(jié)構(gòu)確證和蛋白質(zhì)組學多項成熟的分析技術(shù)已為國內(nèi)外客戶提供了廣泛的服務。
設備儀器:
美國安捷倫公司Agilent (xct-6330) 型號的液相色譜儀,MS為美國熱電公司的TSQ型號質(zhì)譜儀;質(zhì)譜儀采用ESI(電噴霧電離)離子源,MS/MS 串連四極桿分析器??稍诰€檢測極性有機化合物、核酸、多肽、小分子蛋白質(zhì)及其化學修飾產(chǎn)品的實際分子量,并對送檢樣品進行分子量鑒定,純度及修飾效果分析。
質(zhì)量范圍M/Z 10~2,000? 分辨率R=2M
測試范圍:?
多肽、蛋白質(zhì)的電噴霧質(zhì)譜分子量測定以及天然產(chǎn)物分子、生物大分子、有機分子的質(zhì)譜測試和研究
送檢樣品要求:樣品應盡量不含鹽份、離子表面活性劑、去垢劑及一些難揮發(fā)性鹽。樣品送檢量、溶解方式以及未知可否做質(zhì)譜檢測的樣品可與我們的工作人員聯(lián)系以便提高檢測效率。
(送樣單請附帶檢測樣品的品名及精確計算分子量)
送樣須知:
A:樣品量:50pmol干粉或1ug/uL以上(一般測試)、100pmol干粉或1ug/uL以上(MALDI串聯(lián)質(zhì)譜分析)、100ug干粉以上(二硫鍵分析、糖基化分析,磷酸化分析,其他修飾分析)、10ug干粉以上(SDS-PAGE或IEF);
B:鹽含量:揮發(fā)性無機鹽,<20mM,請勿使用PBS、SDS和尿素等質(zhì)譜干擾物質(zhì);
C:考馬斯亮藍染色樣品可全部接收,銀染過程中不得使用戊二醛作為固定劑;
D:請告知樣品是否有修飾,并請注明修飾方式。
主要應用 :?
*?蛋白質(zhì)組學研究 *?寡聚糖和糖蛋白的研究 *?小分子化合物分析
*?藥物發(fā)現(xiàn)和研發(fā) *?食品和環(huán)境樣品分析
檢測報告:
從收到樣品起1-2個工作日內(nèi)可給出樣品的檢測報告,以電子郵件的形式發(fā)給您并附帶檢測結(jié)果分析。包括結(jié)果有:銷售質(zhì)譜:質(zhì)譜圖、肽段分子量、數(shù)據(jù)庫檢索結(jié)果;? 二級質(zhì)譜:質(zhì)譜圖、肽段分子量、數(shù)據(jù)庫檢索結(jié)果、肽段氨基酸序列、修飾位點等。
脂質(zhì)組學分析
對脂類的準確鑒定和絕對定量在脂質(zhì)代謝的綜合研究中起著重要的作用?;诜€(wěn)定同位素標記內(nèi)標(SIL-IS)及響應因子(RF)建立的脂質(zhì)組全定量庫,可對Plasmenyl-glycerophosphatidylcholine(pPC)、Lysoglycerophosphatidylcholine(LPC)和Sphinganine(Sph)等多達34類脂質(zhì)進行準確定性以及絕對定量。相較于傳統(tǒng)的脂質(zhì)組學檢測方法需要添加 多種SIL-IS的弊端,我們通過引入RF使得我們的脂質(zhì)組全定量方法,在保持與傳統(tǒng)方法相當定量精度以及日間重復性的基礎上,可定性定量物質(zhì)種類更多、通量更高。通過對我們包含76361種脂質(zhì)、181300張MS/MS二級質(zhì)譜圖的自建脂質(zhì)二級質(zhì)譜庫的檢索匹配,我們可以僅用單個SIL-IS,對生物樣本種數(shù)萬種脂質(zhì)同時進行準確定性以及絕對定量,且上述工作均基于計算機程序自動化運作,高效便捷。
技術(shù)優(yōu)勢
脂質(zhì)檢測效率高:可實現(xiàn)單一SIL-IS同時高通量定性,絕對定量上萬種脂質(zhì);
專業(yè)團隊檢測分析:通過計算機程序自動化運行。
樣本要求
植物組織? ? ? ? ? ? ? ? ? 200-500 mg
動物及臨床組織標本? ? ?????200 mg
血清、血漿? ? ? ? ? ? ? ? ?200 μL
微生物、細胞? ? ? ? ? ? 1×107?cells
生物學重復
樣本數(shù)量:植物和微生物n≥6,動物樣本n≥10,臨床樣本n≥30,所有重復樣本獨立分析。
檢測平臺
UHPLC-QTOF-MS(Agilent 1290 UHPLC-AB 6600/5600 MS)
UHPLC-QE-MS(Agilent 1290 UHPLC-Thermo Q Exactive Focus/Plus/HF)
檢測范圍
pPC、LPC、Sph、Cer、SM、Cer-p、PhytoSph和HexCer等34類脂質(zhì)
應用方向
1、通過分析各種代謝性疾病的不同代謝途徑的脂質(zhì)成分變化,揭示出相關疾病發(fā)生、發(fā)展過程中脂質(zhì)成分的功能和影響;
2、通過比較不同處理,生物樣本中脂質(zhì)成分的差異,探究脂質(zhì)成分的生物學功能。?
靶標代謝流分析
基于13C或者15N標記的靶標代謝流分析能夠系統(tǒng)地定量細胞或者組織內(nèi)特定代謝通路代謝網(wǎng)絡的流量分布及各代謝途徑的相對貢獻,其優(yōu)點是可以利用細胞內(nèi)代謝物的質(zhì)量同位體信息的分析方法,不但在很多情況下能夠直觀地表明代謝流量的整體走向,而且通過計算能夠準確定量地揭示細胞內(nèi)各個代謝反應的活性,以及深入理解平行反應、可逆反應等多種復雜的細胞內(nèi)代謝過程,直觀揭示細胞胞內(nèi)的主要活性途徑及各個途徑的相對貢獻及其分布變化特點,從而鑒定出相關疾病發(fā)生發(fā)展過程的早期診斷的標志物及其關鍵的主要代謝通路,并揭示其相互調(diào)控規(guī)律,為疾病發(fā)生的臨床早期診斷、藥物靶點治療和預后判斷提供強有力的科學依據(jù)。?
檢測范圍
基于13C 標記的葡萄糖(Glucose)碳代謝流分析
基于13C標記的谷氨酰胺(Glutamine)碳代謝流分析
基于15N標記的谷氨酰胺(Glutamine)氮代謝流分析
非靶標代謝流分析
經(jīng)典代謝組學可以反映機體代謝物的變化及可能被激活的通路,但同一代謝物可能參與多條代謝通路而其豐度不發(fā)生變化。非靶標代謝流可以研究代謝流量隨時間的動態(tài)變化規(guī)律,不限于特定的代謝通路,對流經(jīng)代謝途徑的代謝流量組進行定量分析,能夠很好的解釋代謝物在生物途徑中何如變化,將代謝組學的研究提升到更高的水平和層次。代謝流分析尤其是基于13C標記的代謝流技術(shù)已成為近年來的研究熱點技術(shù)之一。?
技術(shù)優(yōu)勢
分辨率高:可以分辨同位素標記和非標記代謝物;
與靶標代謝流相比,非靶標代謝流不限于特定的代謝通路,可對標記的代謝物進行流向分析。